SP法免疫组化试剂盒(小鼠)

产品货号：

GS4962

中文名称：

SP法免疫组化试剂盒(小鼠)

英文名称：

Streptavidin Peroxidase IHC Kit(Mouse IgG)

产品规格：

100T|500T|1000T

发货周期：

1～3天

产品价格：

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本试剂盒采用SP法进行细胞或组织切片的免疫组织化学染色检测，适用于冷冻切片、石蜡切片和细胞涂片。

检测原理

生物素标记的山羊抗小鼠IgG与一抗结合，辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素与生物素标记的山羊抗小鼠IgG结合，再加入DAB显色液，生物素标记的山羊抗小鼠IgG上的辣根过氧化物酶部分可以催化DAB显色液中的H2O2分解，使联苯胺氧化变成联苯亚胺，在组织切片的一抗结合的抗原位点上出现黄色或棕黄色着色。

产品特点

灵敏度高，特异性强，背景清晰。
操作方便，孵育时间短。

组分	100T	500T	1000T
试剂A：内源性过氧化物酶阻断剂	10mL	50mL	100mL
试剂B：封闭液	10mL	50mL	100mL
试剂C：生物素标记的山羊抗小鼠IgG	50μL	250μL	500μL
试剂D：HRP标记的链霉亲和素	25μL	125μL	250μL
试剂E1：20×DAB缓冲液	0.5mL	2.5mL	5mL
试剂E2：20×DAB底物	0.5mL	2.5mL	5mL
试剂E3：20×DAB色原	0.5mL	2.5mL	5mL

保存：2～8℃，其中试剂C和试剂D需置于-20℃保存，有效期1年。

注意事项

为获得最佳实验结果，请务必优化二抗和HRP标记的链霉亲和素的稀释比例以及DAB显色时间。
本试剂盒适用于绝大多数组织，但对于内源性生物素含量比较丰富的组织(如肾脏、肝脏等)，应用非生物素检测系统，或加用avidin封闭。
建议在实验过程中设置阳性与阴性对照，以防止假阳性或假阴性的结果。
一抗的稀释度、孵育时间、温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说，阳性染色强度弱时，可提高一抗浓度或延长孵育时间；背景过高时，可降低一抗浓度或缩短孵育时间，增加洗涤次数或延长洗涤时间。
本试剂盒中的DAB色原为致癌物质，操作中应采用合理的防护措施。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

免疫组织化学染色的准备工作
- DAB显色工作液的配制
  按照850μL蒸馏水分别加入试剂20×DAB缓冲液、20×DAB底物和20×DAB色原各50μL的比例稀释，混匀，即为DAB显色工作液。DAB显色工作液须现用现配。
- 生物素标记的二抗的稀释
  将生物素标记的二抗按照1:100～1000的比例用PBST进行稀释。根据阳性结果的强弱，其稀释比例可以适当地提高或降低。
- HRP标记的链霉亲和素的稀释
  将HRP标记的链霉亲和素按照1:200～1000的比例用PBST进行稀释。根据阳性结果的强弱，其稀释比例可以适当地提高或降低。
石蜡切片染色
- 切片常规脱蜡至水。
- 对组织进行相应的抗原修复。
- 滴加100μL内源性过氧化物酶阻断剂，室温孵育10～15min，以阻断内源性过氧化物酶的活性。
- PBST冲洗，5min×3次。
- 滴加100μL封闭液，室温孵育30～45min，倾去，不洗。
- 滴加适当比例稀释的一抗，37℃孵育2-3h或4℃过夜，次日室温孵育1h。
- PBST冲洗，5min×3次。
- 滴加50μL生物素标记的二抗稀释液，室温或37℃孵育30min。
- PBST冲洗，5min×3次。
- 滴加50μL HRP标记的链霉亲和素稀释液，室温或37℃孵育30min。
- PBST冲洗，5min×3次。
- 滴加100μL DAB显色工作液，室温显色3～30min，可在显微镜下控制显色时间。蒸馏水冲洗。
- 如果需要，可进行苏木素复染。
- 常规脱水、透明、封片。
血涂片、冰冻切片和细胞切片染色
血涂片、冰冻切片和细胞涂片经固定后，步骤同石蜡切片2～14。

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